分光光度計(jì)的帶寬(bandwidth)很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度??梢酝渡涑鰧?shí)驗(yàn)要求的光譜。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對(duì)復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測(cè)量。可變的單色儀的狹縫寬度能使一臺(tái)分光光度計(jì)滿足多種實(shí)驗(yàn)需要。
分光光度計(jì)是精密儀器,正確安裝、使用和保養(yǎng)對(duì)保持儀器良好的性能和保證測(cè)試的準(zhǔn)確度有重要作用。
1.對(duì)儀器工作環(huán)境的要求
分光光度計(jì)應(yīng)安裝在穩(wěn)定的工作臺(tái)上,(周圍不應(yīng)有強(qiáng)磁場(chǎng), 以防電磁干擾),室內(nèi)溫度應(yīng)保持在(10~30)℃。室內(nèi)應(yīng)干燥,相對(duì)濕度宜控制在<85 %,室內(nèi)應(yīng)無腐蝕性氣體,光線不宜過強(qiáng)。
2.儀器保養(yǎng)和維護(hù)方法
(1)儀器工作電壓一般為220V,允許±10 %的電壓波動(dòng)。為保持光源燈和檢測(cè)系統(tǒng)的穩(wěn)定性,在電源電壓波動(dòng)較大的實(shí)驗(yàn)室配備穩(wěn)壓器。
(2)為了延長(zhǎng)光源使用壽命,在不用時(shí)不用開光源燈。如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定,應(yīng)及時(shí)更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置,不要用手直接接觸窗口或燈泡,避免油污沾附,若不小心接觸過,要用無水乙醇擦拭。
(3)單色器是儀器的核心部分,裝在密封盒內(nèi),不能拆開,為防止色散元件受潮發(fā)霉,必須經(jīng)常更換干燥劑。
(4)必須正確使用吸收池,保護(hù)吸收池光學(xué)面。
(5)光電轉(zhuǎn)換元件不能長(zhǎng)時(shí)間曝光,應(yīng)避免強(qiáng)光照射或受潮積塵。
分光光度計(jì)的檢驗(yàn)小妙招
1.波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的檢驗(yàn):
分光光度計(jì)在使用過程中,由于機(jī)械振動(dòng)、溫度變化、燈絲變形、燈座松動(dòng)或更換燈泡等原因,經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)刻度盤上的讀數(shù)與實(shí)際通過溶液的波長(zhǎng)不符合的現(xiàn)象,
因而導(dǎo)致儀器靈明度降低,影響測(cè)定結(jié)果的精度,需要進(jìn)行檢驗(yàn)。
檢驗(yàn)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度簡(jiǎn)單的方法是用干涉濾光片或鐠釹濾光片測(cè)量?jī)x器的吸收峰值, 如果測(cè)出的值與濾光片標(biāo)準(zhǔn)值之差超出規(guī)程規(guī)定, 則需要進(jìn)行波長(zhǎng)調(diào)節(jié)。
2.透射比正確度的檢驗(yàn):
用透射比標(biāo)準(zhǔn)值分別為10 %、20 %、30 %左右的光譜中性濾光片,可見光區(qū)分別在440、546、635nm波長(zhǎng)處,以空氣為參比,分別測(cè)量各濾光片的透射比,紫外光區(qū)用重鉻酸鉀溶液分別在235、257、313、350nm波長(zhǎng)處,以高氯酸溶液為參比,測(cè)量其透射比。
3.穩(wěn)定度的檢驗(yàn):
在零點(diǎn)不受光的條件下,用零點(diǎn)調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點(diǎn),觀察3分鐘讀取透射比的變化,即為零點(diǎn)穩(wěn)定性。在儀器測(cè)量范圍兩端向中間靠10nm處,調(diào)節(jié)零點(diǎn)后,蓋上樣品室蓋(打開光門),使光電管受光,調(diào)節(jié)透射比為95%(數(shù)顯儀器調(diào)至100%)察3分鐘讀取透射比的變化,為光電流穩(wěn)定性。
4.光的檢驗(yàn):
可見分光計(jì)棱鏡式儀器在420nm處,光柵式儀器在360nm處,紫外分光計(jì)在220nm處分別用符合規(guī)定的截止濾光片,以空氣為參比,測(cè)量其透射比值,即為儀器在相應(yīng)波長(zhǎng)下的雜散輻射率。
為了測(cè)量吸光值,分光光度計(jì)制造商通常使用光電倍增管(photo-multiplier tubes,PMTs)和光敏二極管。提供快速的反應(yīng)時(shí)間和良好的靈敏度,并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍。但一些制造商依賴于光敏二極管的動(dòng)態(tài)范圍在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測(cè)量。